„Javascript“ šiuo metu jūsų naršyklėje išjungtas.Kai javascript išjungtas, kai kurios šios svetainės funkcijos neveiks.
Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Mokslų katedra, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Katalonija, Ispanija * Šie autoriai turi tam tikrų įžvalgų apie šį darbą Equal indėlis fonas: Hialurono rūgštis (HA) yra natūralus polisacharidas, naudojamas gaminant odos užpildus estetiniais tikslais.Kadangi jų pusinės eliminacijos laikas žmogaus audiniuose yra kelios dienos, HA pagrindu pagaminti odos užpildai yra chemiškai modifikuoti, kad prailgintų jų gyvenimą organizme.Dažniausia komercinių HA pagrindu pagamintų užpildų modifikacija yra 1,4-butandiolio diglicidilo eterio (BDDE) naudojimas kaip kryžminio ryšio agentas HA grandinėms susieti.Likęs arba nesureagavęs BDDE laikomas netoksišku, kai yra <2 milijoninės dalys (ppm);todėl, siekiant užtikrinti pacientų saugumą, galutiniame odos užpilde likęs BDDE turi būti kiekybiškai įvertintas.Medžiagos ir metodai: Šiame tyrime aprašomas BDDE ir HA kryžminio ryšio reakcijos šalutinio produkto aptikimas ir apibūdinimas šarminėmis sąlygomis, derinant skysčių chromatografiją ir masės spektrometriją (LC-MS).Rezultatai: Atlikus skirtingas analizes, buvo nustatyta, kad šarminės sąlygos ir aukšta temperatūra, naudotos HA-BDDE hidrogelio dezinfekcijai, paskatino šio naujo šalutinio produkto – „propilenglikolio tipo“ junginio – susidarymą.LC-MS analizė patvirtino, kad šalutinis produktas turi tokią pat monoizotopinę masę kaip BDDE, skirtingą sulaikymo trukmę (tR) ir skirtingą UV absorbcijos (λ = 200 nm) režimą.Skirtingai nei BDDE, LC-MS analizėje buvo pastebėta, kad tokiomis pačiomis matavimo sąlygomis šis šalutinis produktas turi didesnį aptikimo greitį esant 200 nm.Išvada: Šie rezultatai rodo, kad šio naujo junginio struktūroje nėra epoksido.Diskusija atvira siekiant įvertinti šio naujo šalutinio produkto, aptinkamo gaminant HA-BDDE hidrogelį (HA odos užpildą) komerciniais tikslais, riziką.Raktiniai žodžiai: hialurono rūgštis, HA odos užpildas, kryžminė hialurono rūgštis, BDDE, LC-MS analizė, BDDE šalutinis produktas.
Hialurono rūgšties (HA) pagrindu pagaminti užpildai yra labiausiai paplitę ir populiariausi odos užpildai, naudojami kosmetikos tikslais.1 Šis odos užpildas yra hidrogelis, paprastai sudarytas iš >95 % vandens ir 0,5–3 % HA, todėl jiems suteikiama gelio pavidalo struktūra.2 HA yra polisacharidas ir pagrindinis stuburinių gyvūnų tarpląstelinės matricos komponentas.Vienas iš ingredientų.Jį sudaro (1,4)-gliukurono rūgšties-β (1,3)-N-acetilgliukozamino (GlcNAc) pasikartojantys disacharido vienetai, sujungti glikozidinėmis jungtimis.Šis disacharidų modelis yra vienodas visuose organizmuose.Palyginti su kai kuriais baltymų pagrindu pagamintais užpildais (pvz., kolagenu), dėl šios savybės HA yra labai biologiškai suderinama molekulė.Šie užpildai gali turėti aminorūgščių sekos specifiškumą, kurį gali atpažinti paciento imuninė sistema.
Kai naudojamas kaip odos užpildas, pagrindinis HA apribojimas yra jo greitas apykaita audiniuose dėl specifinės fermentų grupės, vadinamos hialuronidazėmis.Iki šiol buvo aprašytos kelios cheminės HA struktūros modifikacijos, padidinančios HA pusinės eliminacijos laiką audiniuose.3 Dauguma šių modifikacijų bando sumažinti hialuronidazės prieigą prie polisacharidų polimerų kryžminant HA grandines.Todėl dėl tiltų susidarymo ir tarpmolekulinių kovalentinių ryšių tarp HA struktūros ir kryžminio ryšio agento, susietas HA hidrogelis gamina daugiau antifermentinių skilimo produktų nei natūralus HA.4-6
Iki šiol cheminės kryžminimo medžiagos, naudojamos susietam HA gaminti, yra metakrilamidas, 7 hidrazidas, 8 karbodiimidas, 9 divinilsulfonas, 1,4-butandiolio diglicidilo eteris (BDDE) ir poli(etilenglikolio) diglicidilo eteris.10 , 11 BDDE šiuo metu yra dažniausiai naudojamas kryžminio ryšio agentas.Nors buvo įrodyta, kad šių tipų hidrogeliai yra saugūs dešimtmečius, naudojami kryžminimo agentai yra reaktyvūs reagentai, kurie gali būti citotoksiški ir kai kuriais atvejais mutageniški.12 Todėl jų likutinis kiekis galutiniame hidrogelyje turi būti didelis.BDDE laikomas saugiu, kai likutinė koncentracija yra mažesnė nei 2 milijoninės dalys (ppm).4
Yra keletas metodų, leidžiančių nustatyti mažos liekanos BDDE koncentraciją, kryžminio ryšio laipsnį ir pakeitimo padėtį HA hidrogeliuose, pavyzdžiui, dujų chromatografija, dydžio išskyrimo chromatografija kartu su masės spektrometrija (MS), branduolinio magnetinio rezonanso (BMR) fluorescencijos matavimo metodai ir Diodų matrica sujungta didelio efektyvumo skysčių chromatografija (HPLC).13-17 Šiame tyrime aprašomas šalutinio produkto aptikimas ir apibūdinimas galutiniame skersiniais ryšiais susietame HA hidrogelyje, gautame BDDE ir HA reakcijose šarminėmis sąlygomis.HPLC ir skysčių chromatografija-masių spektrometrija (LC-MS analizė).Kadangi šio šalutinio BDDE produkto toksiškumas nežinomas, rekomenduojame jo likučių kiekybinį nustatymą nustatyti panašiu būdu, kaip įprastai naudojant BDDE galutiniame produkte.
Gautos HA natrio druskos (Shiseido Co., Ltd., Tokijas, Japonija) molekulinė masė yra ~1 368 000 Da (Laurent metodas) 18 , o vidinė klampa - 2,20 m3/kg.Kryžminimo reakcijai BDDE (≥95%) buvo nupirkta iš Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, JAV).Fosfatu buferinis fiziologinis tirpalas, kurio pH 7,4, buvo nupirktas iš Sigma-Aldrich Company.Visi LC-MS analizėje naudojami tirpikliai, acetonitrilas ir vanduo buvo įsigyti iš HPLC kokybės.Skruzdžių rūgštis (98%) perkama kaip reagento rūšis.
Visi eksperimentai buvo atlikti naudojant UPLC Acquity sistemą (Waters, Milford, MA, JAV) ir prijungti prie API 3000 trigubo kvadrupolio masės spektrometro, aprūpinto elektropurškimo jonizacijos šaltiniu (AB SCIEX, Framingham, MA, JAV).
Kryžminių HA hidrogelių sintezė buvo pradėta pridedant 198 mg BDDE į 10 % (m/m) natrio hialuronato (NaHA) tirpalą, esant 1 % šarmui (natrio hidroksidas, NaOH).Galutinė BDDE koncentracija reakcijos mišinyje buvo 9,9 mg/ml (0,049 mM).Tada reakcijos mišinys buvo kruopščiai sumaišytas, homogenizuotas ir leidžiamas 4 valandas 45 °C temperatūroje.19 Reakcijos pH palaikomas ~12.
Po to reakcijos mišinys buvo plaunamas vandeniu, o galutinis HA-BDDE hidrogelis filtruojamas ir praskiedžiamas PBS buferiu, kad būtų pasiekta HA koncentracija nuo 10 iki 25 mg/ml, o galutinis pH – 7,4.Siekiant sterilizuoti pagamintus skersinio ryšio HA hidrogelius, visi šie hidrogeliai yra autoklavuojami (120°C 20 min.).Išgrynintas BDDE-HA hidrogelis iki analizės laikomas 4 °C temperatūroje.
Norint išanalizuoti BDDE, esančio kryžminio ryšio HA produkte, buvo pasvertas 240 mg mėginys, įdėtas į centrinę angą (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, JAV; tūris 0,5 ml) ir centrifuguojamas 10 000 aps./min. kambario temperatūroje. 10 minučių.Iš viso buvo surinkta ir ištirta 20 µL ištraukiamo skysčio.
Norint išanalizuoti BDDE standartą (Sigma-Aldrich Co) šarminėmis sąlygomis (1%, 0,1% ir 0,01% NaOH), jei tenkinamos šios sąlygos, skysto mėginio santykis yra 1:10, 1:100 arba iki 1:1 000 000 Jei reikia, analizei naudokite dejonizuotą MilliQ vandenį.
Pradinėms medžiagoms, naudotoms kryžminio ryšio reakcijoje (HA 2%, H2O, 1% NaOH ir 0,049 mM BDDE), 1 ml kiekvieno iš šių medžiagų paruošto mėginio buvo ištirta naudojant tas pačias analizės sąlygas.
Norint nustatyti jonų žemėlapyje pasirodančių smailių specifiškumą, į 20 µL mėginį buvo pridėta 10 µL 100 ppb BDDE etaloninio tirpalo (Sigma-Aldrich Co).Šiuo atveju galutinė etalono koncentracija kiekviename mėginyje yra 37 ppb.
Pirmiausia paruoškite BDDE pradinį tirpalą, kurio koncentracija yra 11 000 mg/L (11 000 ppm), praskiesdami 10 μL standartinio BDDE (Sigma-Aldrich Co) su 990 μL MilliQ vandens (tankis 1,1 g/mL).Naudokite šį tirpalą, kad paruoštumėte 110 µg/L (110 ppb) BDDE tirpalą kaip tarpinį standartinį skiedimą.Tada naudokite tarpinį BDDE standartinį skiediklį (110 ppb), kad paruoštumėte standartinę kreivę, praskiesdami tarpinį skiediklį keletą kartų, kad pasiektumėte pageidaujamą 75, 50, 25, 10 ir 1 ppb koncentraciją.Kaip parodyta 1 paveiksle, nustatyta, kad BDDE standartinė kreivė nuo 1,1 iki 110 ppb turi gerą tiesiškumą (R2>0,99).Standartinė kreivė buvo pakartota keturiuose nepriklausomuose eksperimentuose.
1 pav. BDDE standartinė kalibravimo kreivė, gauta LC-MS analize, kurioje stebima gera koreliacija (R2>0,99).
Santrumpos: BDDE, 1,4-butandiolio diglicidilo eteris;LC-MS, skysčių chromatografija ir masės spektrometrija.
Siekiant nustatyti ir kiekybiškai įvertinti BDDE standartus, esančius kryžminiame HA, ir BDDE standartus baziniame tirpale, buvo naudojama LC-MS analizė.
Chromatografinis atskyrimas buvo atliktas LUNA 2,5 µm C18(2)-HST kolonėlėje (50 x 2,0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, JAV) ir analizės metu laikoma kambario temperatūroje (25 °C).Judančioji fazė susideda iš acetonitrilo (tirpiklis A) ir vandens (tirpiklis B), kuriame yra 0,1 % skruzdžių rūgšties.Judanti fazė eliuuojama gradiento eliuavimo būdu.Gradientas yra toks: 0 minučių, 2% A;1 minutė, 2% A;6 minutės, 98 % A;7 minutės, 98 % A;7,1 min., 2% A;10 minučių , 2% A. Veikimo laikas yra 10 minučių, o injekcijos tūris yra 20 µL.BDDE sulaikymo laikas yra apie 3,48 minutės (remiantis eksperimentais, svyruoja nuo 3,43 iki 4,14 minutės).Mobilioji fazė buvo pumpuojama 0,25 ml/min srauto greičiu LC-MS analizei.
BDDE analizei ir kiekybiniam įvertinimui MS, UPLC sistema (Waters) derinama su API 3000 trigubu kvadrupoliu masės spektrometru (AB SCIEX), turinčiu elektropurškimo jonizacijos šaltinį, o analizė atliekama teigiamų jonų režimu (ESI+).
Pagal jonų fragmentų analizę, atliktą naudojant BDDE, didžiausias intensyvumas buvo fragmentas, atitinkantis 129,1 Da (6 pav.).Todėl, naudojant kelių jonų stebėjimo režimą (MIM), skirtą kiekybiniam įvertinimui, BDDE masės konversija (masės ir įkrovos santykis [m/z]) yra 203,3/129,1 Da.LC-MS analizei taip pat naudojamas viso nuskaitymo (FS) ir gaminio jonų nuskaitymo (PIS) režimas.
Siekiant patikrinti metodo specifiškumą, buvo analizuojamas tuščiasis mėginys (pradinė juda fazė).Tuščiame mėginyje, kurio masės konversija buvo 203,3/129,1 Da, signalo neaptikta.Atsižvelgiant į eksperimento pakartojamumą, buvo ištirta 10 standartinių 55 ppb injekcijų (kalibravimo kreivės viduryje), todėl liekamasis standartinis nuokrypis (RSD) <5% (duomenys nerodomi).
Likęs BDDE kiekis buvo kiekybiškai įvertintas aštuoniuose skirtinguose autoklaviniuose BDDE kryžminiuose HA hidrogeliuose, atitinkančiuose keturis nepriklausomus eksperimentus.Kaip aprašyta skyriuje „Medžiagos ir metodai“, kiekybinis įvertinimas įvertinamas pagal BDDE standartinio praskiedimo regresijos kreivės vidutinę vertę, kuri atitinka unikalią smailę, aptiktą esant BDDE masės pokyčiui 203,3/129,1 Da su sulaikymu. laikas nuo 3,43 iki 4,14 minučių Nelaukiu.2 paveiksle parodytas 10 ppb BDDE etaloninio standarto chromatogramos pavyzdys.1 lentelėje apibendrinamas likęs BDDE kiekis aštuoniuose skirtinguose hidrogeliuose.Vertės diapazonas yra nuo 1 iki 2,46 ppb.Todėl likutinė BDDE koncentracija mėginyje yra priimtina žmonėms vartoti (<2 ppm).
2 pav. 10 ppb BDDE etaloninio standarto (Sigma-Aldrich Co) jonų chromatograma, MS (m/z) perėjimas, gautas atliekant LC-MS analizę 203,30/129,10 Da (teigiamas MRM režimas).
Santrumpos: BDDE, 1,4-butandiolio diglicidilo eteris;LC-MS, skysčių chromatografija ir masių spektrometrija;MRM, kelių reakcijų stebėjimas;MS, masė;m/z, masės ir įkrovos santykis.
Pastaba: 1–8 pavyzdžiai yra autoklaviniai BDDE skersiniai HA hidrogeliai.Taip pat pranešama apie likusį BDDE kiekį hidrogelyje ir BDDE sulaikymo laiko pikas.Galiausiai taip pat pranešama apie naujų smailių su skirtingu sulaikymo laiku egzistavimą.
Santrumpos: BDDE, 1,4-butandiolio diglicidilo eteris;HA, hialurono rūgštis;MRM, kelių reakcijų stebėjimas;tR, sulaikymo laikas;LC-MS, skysčių chromatografija ir masių spektrometrija;RRT, santykinis sulaikymo laikas.
Keista, bet LC-MS jonų chromatogramos analizė parodė, kad remiantis visais analizuotais autoklaviniais skersiniais ryšiais susietais HA hidrogelio mėginiais, buvo papildomas smailės trumpesnis sulaikymo laikas nuo 2,73 iki 3,29 minutės.Pavyzdžiui, 3 paveiksle pavaizduota kryžminio ryšio HA mėginio jonų chromatograma, kur papildoma smailė atsiranda esant skirtingam sulaikymo laikui – maždaug 2,71 minutės.Nustatyta, kad stebimas santykinis sulaikymo laikas (RRT) tarp naujai pastebėtos smailės ir smailės iš BDDE yra 0,79 (1 lentelė).Kadangi žinome, kad naujai pastebėta smailė mažiau išlieka C18 stulpelyje, naudojama LC-MS analizėje, nauja smailė gali atitikti labiau polinį junginį nei BDDE.
3 pav. Kryžminio HA hidrogelio mėginio jonų chromatograma, gauta naudojant LC-MS (MRM masės konversija 203,3/129,0 Da).
Santrumpos: HA, hialurono rūgštis;LC-MS, skysčių chromatografija ir masių spektrometrija;MRM, kelių reakcijų stebėjimas;RRT, santykinis sulaikymo laikas;tR, sulaikymo laikas.
Siekiant atmesti galimybę, kad pastebėtos naujos smailės gali būti teršalai, iš pradžių buvę naudojamose žaliavose, šios žaliavos taip pat buvo analizuojamos naudojant tą patį LC-MS analizės metodą.Analizuojamos pradinės medžiagos yra vanduo, 2% NaHA vandenyje, 1% NaOH vandenyje ir BDDE toje pačioje koncentracijoje, kuri buvo naudojama kryžminio sujungimo reakcijoje.Naudotos pradinės medžiagos jonų chromatograma nerodė jokio junginio ar smailės, o jos sulaikymo laikas atitinka naują stebėtą smailę.Šis faktas atmeta mintį, kad ne tik pradinėje medžiagoje gali būti junginių ar medžiagų, kurios gali trukdyti analizės procedūrai, bet nėra jokių galimo kryžminio užteršimo su kitais laboratoriniais produktais požymių.Koncentracijos vertės, gautos atlikus BDDE ir naujų smailių LC-MS analizę, pateiktos 2 lentelėje (1–4 mėginiai), o jonų chromatograma – 4 paveiksle.
Pastaba: 1–4 pavyzdžiai atitinka žaliavas, naudojamas autoklaviniams BDDE skersiniais ryšiais HA hidrogeliams gaminti.Šie mėginiai nebuvo autoklavuoti.
Santrumpos: BDDE, 1,4-butandiolio diglicidilo eteris;HA, hialurono rūgštis;LC-MS, skysčių chromatografija ir masių spektrometrija;MRM, kelių reakcijų stebėjimas.
4 paveikslas atitinka HA ir BDDE kryžminio ryšio reakcijoje naudotos žaliavos mėginio LC-MS chromatogramą.
Pastaba: Visi jie matuojami esant tokiai pačiai koncentracijai ir santykiams, kurie naudojami kryžminio sujungimo reakcijai atlikti.Chromatogramoje analizuotų žaliavų skaičiai atitinka: (1) vandenį, (2) 2% HA vandeninį tirpalą, (3) 1% NaOH vandeninį tirpalą.LC-MS analizė atliekama 203,30/129,10 Da masės konvertavimui (teigiamo MRM režimu).
Santrumpos: BDDE, 1,4-butandiolio diglicidilo eteris;HA, hialurono rūgštis;LC-MS, skysčių chromatografija ir masių spektrometrija;MRM, kelių reakcijų stebėjimas.
Buvo tiriamos sąlygos, lėmusios naujų smailių susidarymą.Siekiant ištirti, kaip reakcijos sąlygos, naudojamos gaminant kryžminį HA hidrogelį, veikia BDDE kryžminio ryšio agento reaktyvumą, dėl kurio susidaro naujos smailės (galimi šalutiniai produktai), buvo atlikti įvairūs matavimai.Šiuose nustatymuose mes ištyrėme ir išanalizavome galutinį BDDE kryžminį jungiklį, kuris buvo apdorotas skirtingomis NaOH koncentracijomis (0%, 1%, 0, 1% ir 0, 01%) vandeninėje terpėje, po to autoklave arba be jo.Bakterijų procedūra, skirta imituoti tas pačias sąlygas, yra tokia pati kaip metodas, naudojamas gaminant kryžminį HA hidrogelį.Kaip aprašyta skyriuje „Medžiagos ir metodai“, mėginio masės pokytis buvo ištirtas LC-MS iki 203,30/129,10 Da.Apskaičiuotas BDDE ir naujos smailės koncentracija, o rezultatai pateikti 3 lentelėje. Mėginiuose, kurie nebuvo autoklavuoti, naujų smailių neaptikta, neatsižvelgiant į tai, ar tirpale yra NaOH (1-4 mėginiai, lentelė 3).Autoklavuotuose mėginiuose naujos smailės nustatomos tik esant NaOH tirpale, o smailės susidarymas, atrodo, priklauso nuo NaOH koncentracijos tirpale (5-8 mėginiai, 3 lentelė) (RRT = 0,79).5 paveiksle parodytas jonų chromatogramos pavyzdys, rodantis du autoklavuotus mėginius, kai yra arba nėra NAOH.
Santrumpos: BDDE, 1,4-butandiolio diglicidilo eteris;LC-MS, skysčių chromatografija ir masių spektrometrija;MRM, kelių reakcijų stebėjimas.
Pastaba: Viršutinė chromatograma: Mėginys buvo apdorotas 0,1% NaOH vandeniniu tirpalu ir autoklave (120 °C 20 minučių).Apatinė chromatograma: mėginys nebuvo apdorotas NaOH, o autoklavuojamas tomis pačiomis sąlygomis.203,30/129,10 Da masės konversija (teigiamo MRM režimu) buvo ištirta LC-MS.
Santrumpos: BDDE, 1,4-butandiolio diglicidilo eteris;LC-MS, skysčių chromatografija ir masių spektrometrija;MRM, kelių reakcijų stebėjimas.
Visuose autoklavuotuose mėginiuose, su NaOH arba be jo, BDDE koncentracija labai sumažėjo (iki 16,6 karto) (5-8 mėginiai, 2 lentelė).BDDE koncentracijos sumažėjimas gali būti susijęs su tuo, kad esant aukštai temperatūrai vanduo gali veikti kaip bazė (nukleofilas), atverianti BDDE epoksido žiedą ir sudaryti 1,2-diolio junginį.Šio junginio monoizotopinė kokybė skiriasi nuo BDDE, todėl tai nebus paveikta.LC-MS aptiko 203,30/129,10 Da masės poslinkį.
Galiausiai, šie eksperimentai rodo, kad naujų smailių susidarymas priklauso nuo BDDE, NAOH buvimo ir autoklavavimo proceso, bet neturi nieko bendra su HA.
Tada nauja smailė, nustatyta esant maždaug 2, 71 minutės sulaikymo laikui, buvo apibūdinta LC-MS.Šiuo tikslu BDDE (9, 9 mg / ml) buvo inkubuojamas 1% NaOH vandeniniame tirpale ir autoklave.4 lentelėje naujos smailės charakteristikos palygintos su žinoma BDDE etalonine smaile (sulaikymo laikas apytiksliai 3,47 minutės).Remiantis dviejų smailių jonų fragmentacijos analize, galima daryti išvadą, kad smailė, kurios sulaikymo laikas yra 2,72 minutės, rodo tuos pačius fragmentus, kaip ir BDDE smailė, tačiau skirtingo intensyvumo (6 pav.).Smailės, atitinkančios sulaikymo trukmę (PIS), 2,72 minutės, smailė buvo pastebėta po suskaidymo, kai masė buvo 147 Da.Esant šiam nustatymui naudotai BDDE koncentracijai (9,9 mg/mL), po chromatografinio atskyrimo taip pat buvo stebimi skirtingi absorbcijos režimai (UV, λ=200 nm) ultravioletiniame spektre (7 pav.).Smailė, kurios sulaikymo laikas yra 2, 71 minutės, vis dar matoma esant 200 nm, o BDDE smailė tomis pačiomis sąlygomis negali būti stebima chromatogramoje.
4 lentelė Naujos smailės, kurios sulaikymo laikas yra apie 2,71 minutės, ir BDDE smailės, kurios sulaikymo laikas yra 3,47 minutės, apibūdinimo rezultatai
Pastaba: Norint gauti šiuos rezultatus, buvo atlikta dviejų smailių LC-MS ir HPLC analizė (MRM ir PIS).HPLC analizei naudojamas UV aptikimas, kurio bangos ilgis yra 200 nm.
Santrumpos: BDDE, 1,4-butandiolio diglicidilo eteris;HPLC, didelio efektyvumo skysčių chromatografija;LC-MS, skysčių chromatografija ir masių spektrometrija;MRM, kelių reakcijų stebėjimas;m/z, masės ir įkrovos santykis;PIS, gaminys Jonų nuskaitymas;ultravioletinė šviesa, ultravioletinė šviesa.
Pastaba: masės fragmentai gaunami naudojant LC-MS analizę (PIS).Viršutinė chromatograma: BDDE standartinio mėginio fragmentų masės spektras.Apatinė chromatograma: aptiktos naujos smailės masės spektras (RRT, susietas su BDDE smaile, yra 0,79).BDDE buvo apdorotas 1% NaOH tirpale ir autoklavuotas.
Santrumpos: BDDE, 1,4-butandiolio diglicidilo eteris;LC-MS, skysčių chromatografija ir masių spektrometrija;MRM, kelių reakcijų stebėjimas;PIS, produkto jonų nuskaitymas;RRT, santykinis sulaikymo laikas.
7 paveikslas 203,30 Da pirmtako jonų jonų chromatograma ir (A) nauja smailė, kurios sulaikymo laikas yra 2,71 minutės, ir (B) UV aptikimas BDDE etaloninio standarto smailės 3,46 min. esant 200 nm.
Visuose pagamintuose kryžminio ryšio HA hidrogeliuose buvo pastebėta, kad likutinė BDDE koncentracija po LC-MS kiekybinio įvertinimo buvo <2 ppm, tačiau analizėje atsirado naujas nežinomas smailės.Ši nauja smailė neatitinka BDDE standartinio produkto.BDDE standartiniam produktui taip pat buvo atlikta tokia pati kokybės konversija (MRM konversija 203.30/129.10 Da) teigiamu MRM režimu.Paprastai kiti analitiniai metodai, tokie kaip chromatografija, naudojami kaip ribiniai BDDE aptikimo hidrogeliuose bandymai, tačiau maksimali aptikimo riba (LOD) yra šiek tiek mažesnė nei 2 ppm.Kita vertus, iki šiol BMR ir MS buvo naudojami apibūdinti HA kryžminio susiejimo ir (arba) modifikavimo laipsnį kryžminių HA produktų cukraus vienetų fragmentuose.Šių metodų tikslas niekada nebuvo kiekybiškai įvertinti likutinį BDDE aptikimą esant tokioms mažoms koncentracijoms, kaip aprašome šiame straipsnyje (mūsų LC-MS metodo LOD = 10 ppb).
Paskelbimo laikas: 2021-09-01